Regeneración y transformación genética para la obtención de plantas de olivo resistentes a patógenos fúngicos

Abstract

Biología Vegetal (Botánica y Fisiología Vegetal) Resumen tesis: El objetivo global de esta tesis es el desarrollo de herramientas biotecnológicas para la obtención de plantas de olivo (Olea europaea L.) con mayor resistencia a patógenos fúngicos, en particular, Verticillium dahliae, agente causal de la Verticilosis, y Rosellinia necatrix, causante de la podredumbre blanca radicular, enfermedad emergente en las nuevas plantaciones de olivo. Este objetivo global se ha abordado en tres objetivos parciales. En el primero, se ha establecido un protocolo de regeneración vía embriogénesis somática para material adulto de olivo silvestre. Para la inducción de embriogénesis, se testaron distintos medios de cultivo y tipos de explanto. Se obtuvieron cultivos embriogénicos en los genotipos StopVert y Ac-18, resistentes a Verticilosis, utilizando como explantos ápices caulinares de brotes micropropagados, cultivados durante 4 días en medio líquido MS ½ suplementado con 30 uM TDZ y 0.54 uM NAA, seguido del cultivo en el mismo medio sólido sin reguladores de crecimiento. Las plantas regeneradas a partir de callo embriogénico del genotipo StopVert no mostraron polimorfismos, en comparación con la planta donante, mediante marcadores SSR y RAPDs, así como tampoco variaciones fenotípicas con respecto a brotes micropropagados derivados de yemas laterales. En el segundo objetivo, se evaluó la tolerancia a V. dahliae y R. necatrix en plantas de olivo que expresan el gen antifúngico afp de Aspergillus giganteus. Se transformaron cultivos embriogénicos de olivo, derivados de radícula, con un vector binario conteniendo el gen afp bajo el control del promotor constitutivo CaMV35S. Se obtuvieron 6 líneas transgénicas, 5 de las cuáles integraron el transgén, mientras que una de ellas, línea AFP13, solo incorporó el gen de selección nptII.